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量子點熒光免疫層析POCT
    發布時間: 2024-04-29 13:43    
量子點熒光免疫層析POCT

在免疫領域,現階段市面主流POCT以免疫熒光層析為主。通常免疫熒光較多采用熒光素作為標記物,熒光素是具有熒光特性的一類有機染料,然而,有機染料標記物光照下易分解,易發生光漂白現象,具有濃度猝滅特征,影響了分析結果的準確性和可靠性,因此尋求一種穩定高效,熒光壽命長,抗光漂白性強的熒光標記物顯得尤為重要。





量子點(簡稱QDs,又稱半導體納米粒子)是近 20 年來發展起來的半導體納米晶材料,是由Ⅱ~Ⅵ族或Ⅲ~V族元素組成的,半徑小于或接近于激光玻爾半徑,能夠接受激發光產生熒光的一類半導體納米顆粒,其中研究較多的主要是CdX(x=S、Se、Te),直徑約為2nm-6nm,存在顯著的量子尺寸效應和表面效應,具有常規材料所不具備的光吸收特性,使其應用領域越來越廣泛,特別是在免疫生物學和臨床檢驗學等研究中潛在的應用價值,引起了廣大科學工作者的極大關注,近幾年來已從細胞標記等應用逐漸向多個領域的檢測與診斷方向滲透。

量子點作為熒光試劑探針標記生物大分子,正是納米材料在生物分析領域的重要應用之一,目前國內許多體外診斷企業開始采用這一材料作為其熒光免疫層析平臺的標記物。




與普通的熒光染料相比較,量子點具有以下特點:



有機染料熒光分子激光譜帶較窄,每一種熒光分子必須用合適能量的光來激發,而且產生的熒光峰較寬,不對稱,有些拖尾。這給區分不同的探針分子帶來困難,很難利用有機染料分子同時檢測多種組分。量子點由于量子限域效應使其激發波長的范圍很寬,可以被波長短于發射光的光(一般短10nm以上)激發,并產生窄(半波寬約25nm)而對稱的發射光譜,從而避免了相鄰探測通道的串擾。



量子點具有“調色”功能,不同粒徑大小的量子點具有不同的顏色,激發量子點的激發波長范圍很寬,且連續分布,所以可以用同一波長的光激發不同大小的量子點而獲得多種顏色標記,是一類理想的熒光探針。



量子點的熒光強度強,穩定性好,抗漂白能力強,可以經受多次激發,且標記后對生物大分子的生理活性影響很小,因此為研究生物大分子之間的長期作用提供了可能。



生物相容性好,尤其是經過各種化學修飾之后,可以進行特異性連接,細胞毒性低,對生物體危害小,可進行生物活體標記和檢測,而傳統的有機熒光染料一般毒性較大,生物相容性差。



熒光壽命長,典型的有機熒光染料的熒光壽命僅為幾納秒(ns),這與很多樣本的自發熒光衰減的時間相當,量子點的熒光壽命可持續長達數十納秒(20ns-50ns),當光激發數納秒以后,大多數的自發熒光背景已經衰減,而量子點熒光仍然存在,此時即可獲得無背景干擾的熒光信號。








量子點熒光免疫層析技術利用量子點熒光探針做為標記物,不僅充分體現了免疫層析技術的簡便,快速,特異性強的優點,而且展示了量子點的高靈敏度,以及它的熒光特性,顯示出巨大的發展潛力和廣闊的應用前景。





隨著其應用越來越廣泛,量子點免疫熒光層析技術也在不斷地發展與改進,目前已實現了以下幾個方面的改進:



優化了量子點熒光探針的制備,得到熒光強度高的QDs,檢測信號會隨著QDs的熒光增強而大大提高,可大大提高檢測靈敏度,有利于信號的檢測。



實現定量檢測。目前熒光免疫平臺均配套定量檢測儀器,可以定量檢測出待測物的濃度,打破了傳統的膠體金免疫層析技術不能定量的限制,量子點免疫層析技術的應用,可大大提高定量檢測的準確性和穩定性。



量子點的多色檢測。QDs其中一個優點就是具有可精確調節的發射波長,可以通過調整粒子尺寸來得到不同發射的熒光QDs,無需改變粒子的組成和表面性質,使得量子點可以用于多種組分的多色標記,實現多組份的同時檢測,這將比傳統的膠體金免疫層析技術的多元檢測體現出更大的優勢,減少了不同抗體間的交叉反應,特異性更強,相互間不會產生干擾。



      量子點熒光免疫層析技術現在一般采用量子點微球的方式,即通過物理或化學方法將量子點與高聚物材料摻雜的復合結構,粒徑在納米級至微米級范圍,增大粒徑,比單純量子點有更高的熒光強度和穩定性。具體來講,一般將量子點的表面引入極性的官能團如羧基等,使得量子點具備水溶性的同時又能帶上與生物大分子鏈接的基團,再通過交聯劑將量子點與生物大分子進行共價偶聯或其他方式鏈接。




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